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不同類型的指示劑在SDS-PAGE電泳中的遷移情況有何差異?

更新時(shí)間:2025-05-16      點(diǎn)擊次數(shù):69

不同類型的指示劑在SDS-PAGE電泳中的遷移情況有何差異?

SDS - PAGE 電泳中常用的指示劑有溴酚藍(lán)、二甲苯青 FF 和銀染指示劑等,它們的分子大小、電荷性質(zhì)不同,在電泳中的遷移情況也存在差異,以下是具體介紹:


  • 溴酚藍(lán)

    • 遷移速度:溴酚藍(lán)的分子量較小,在 SDS - PAGE 電泳中遷移速度較快。通常在 10% - 12% 的聚丙烯酰胺凝膠中,它的遷移位置大致相當(dāng)于 3 - 5 kDa 的蛋白質(zhì)。

    • 顏色變化:溴酚藍(lán)在堿性條件下呈藍(lán)色,在酸性條件下呈黃色。在電泳過(guò)程中,由于凝膠環(huán)境通常為堿性,所以它一直保持藍(lán)色,便于觀察電泳的進(jìn)程。

  • 二甲苯青 FF

    • 遷移速度:二甲苯青 FF 的分子量比溴酚藍(lán)大,遷移速度較慢。在相同濃度的聚丙烯酰胺凝膠中,它的遷移位置大約相當(dāng)于 40 - 50 kDa 的蛋白質(zhì)。

    • 顏色變化:二甲苯青 FF 通常呈現(xiàn)藍(lán)色,在電泳過(guò)程中顏色相對(duì)穩(wěn)定,也是通過(guò)其在凝膠中的位置來(lái)指示電泳的進(jìn)度。

  • 銀染指示劑

    • 遷移速度:銀染指示劑并非傳統(tǒng)意義上在電泳過(guò)程中實(shí)時(shí)觀察的指示劑,而是用于在銀染步驟中幫助判斷染色和脫色程度。它一般與蛋白質(zhì)樣品一起電泳,但在電泳過(guò)程中其遷移情況并不作為實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

    • 顏色變化:在銀染過(guò)程中,銀染指示劑會(huì)與銀離子發(fā)生反應(yīng),通常會(huì)先于蛋白質(zhì)條帶顯色,幫助實(shí)驗(yàn)者判斷染色時(shí)間。在脫色過(guò)程中,它也會(huì)先于蛋白質(zhì)條帶褪色,可作為脫色終止的參考,其顏色變化從深色(如棕色或黑色)逐漸變?yōu)闊o(wú)色。



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